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蛋白酶K跟蛋白酶的區(qū)別在哪里?

更新時間:2019-04-22      點擊次數(shù):2577
  蛋白酶K主要應(yīng)用于基因檢測中基因抽取,是檢測試劑盒生產(chǎn)的重要原料,蛋白酶K產(chǎn)品由于在尿素和SDS中仍然具有降解天然蛋白質(zhì)的能力,因而被廣泛應(yīng)用于制備脈沖電泳的染色體DNA,以及去除DNA和RNA中的核酸酶。現(xiàn)有基因抽提及檢測試劑盒中均需配備該酶。
  蛋白酶K跟蛋白酶有什么區(qū)別:
  蛋白酶K廣泛應(yīng)用于分子生物學,藥理學等科研方面.一種非特異性、枯草桿菌蛋白酶相關(guān)的絲氨酸蛋白酶,具有很高的比活性.一般儲存在-20°C,避光防潮密閉干燥。
  蛋白酶是所有能夠催化分解蛋白質(zhì)的酶類的統(tǒng)稱,而蛋白酶K則是特指一種枯草蛋白酶類的高活性蛋白酶,用于生物樣品中蛋白質(zhì)的降解,比如在提取DNA時溶解DNA的水中就有一定量的蛋白酶K.所以它們不屬于同一個產(chǎn)品。
  蛋白酶K配制標準:20mg/ml蛋白酶K配制標準(proteinaseK):將200mg的蛋白酶K加入到9.5ml水中,輕輕搖動,直至蛋白酶K*溶解。不要渦旋混合。加水定容到10ml,然后分裝成小份貯存于-20℃。
  蛋白酶K的保存:保存在-20℃冰箱里,避免反復(fù)凍融,有效保證12月。
  孵育溫度為55至65℃,理想孵育溫度為58℃,孵育時間為15分鐘至48小時;理想孵育時間為2小時。
  作用:蛋白酶K在原位雜交技術(shù)中通常用于雜交前的處理,它具有消化包圍靶DNA蛋白質(zhì)的作用,以增加探針與靶核酸結(jié)合的機會,提高雜交信號.但蛋白酶K的濃度過高、消化時間過長或孵育溫度過高時,都會對細胞的結(jié)構(gòu)有一定的破壞,導致組織切片的脫落,細胞核?的消失,從而影響雜交結(jié)果。EDTA緩沖液可以替代蛋白酶K的作用,解決上述出現(xiàn)的問題,并能達到理想的染色效果。
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