簡(jiǎn)要描述:D3030L1260 EZ ECL plus化學(xué)發(fā)光液(增強(qiáng)型)用于檢測(cè)直接或間接標(biāo)記辣根過(guò)氧化物酶HRP的抗體及其關(guān)聯(lián)的抗原。由于采用了*的發(fā)光底物系統(tǒng),可使用更高的抗體稀釋倍數(shù)(1:2000~1:10000),極其節(jié)省抗體, 可檢測(cè)低皮克級(jí)的蛋白,操作步驟無(wú)需進(jìn)行特別優(yōu)化。靈敏度高,信號(hào)持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)達(dá)5小時(shí),不但適用于Xjiaopian、也可用CCD或激光成像儀成像。
詳細(xì)介紹
品牌 | Life-iLab/李記生物 | 貨號(hào) | AP34L014/AP34L015 |
---|---|---|---|
規(guī)格 | 100mL | 供貨周期 | 現(xiàn)貨 |
應(yīng)用領(lǐng)域 | 環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),綜合 |
產(chǎn)品描述
EZ ECL plus化學(xué)發(fā)光液(增強(qiáng)型)是一款高靈敏度的化學(xué)發(fā)光(ECL)HRP底物,可幫助用戶在免疫印跡分析過(guò)程中實(shí)現(xiàn)皮克級(jí)的蛋白檢測(cè)(~1×10-12g),極其節(jié)省抗體。EZ ECL 底物可為使用辣根過(guò)氧化物酶(HRP)偶聯(lián)物的免疫印跡實(shí)驗(yàn)提供明亮的信號(hào)和皮克級(jí)檢測(cè)靈敏度。該底物能夠兼容各種膜、封閉液和寬范圍抗體稀釋液,以出色性能、通用性和高性價(jià)比,滿足用戶的免疫印跡應(yīng)用需求。
EZ ECL 底物的特點(diǎn):
• 靈敏度高:檢測(cè)硝化纖維素膜或PVDF膜上皮克級(jí)的蛋白條帶。
• 長(zhǎng)信號(hào)持續(xù)時(shí)間:在條件優(yōu)化情況下,經(jīng)底物孵育的印跡條帶能夠持續(xù)輸出 6~8 h 的可檢測(cè)光信號(hào)。
• 試劑穩(wěn)定:試劑盒在室溫下可穩(wěn)定放置長(zhǎng)達(dá)6個(gè)月,4℃條件下存放1年不影響使用。
建議稀釋濃度:
• 一抗?jié)舛?/span>:建議以1mg/mL儲(chǔ)備液起1:1,000-1:5,000 或 0.2-1ug/mL
• 二抗?jié)舛?/span>:建議以1mg/mL儲(chǔ)備液起1:20,000-1:100,000或10-50ng/mL
訂購(gòu)信息
產(chǎn)品名稱(chēng) | 貨號(hào) | 規(guī)格 |
EZ ECL 增強(qiáng)型化學(xué)發(fā)光液 | AP34L014 | 100 mL |
EZ ECL 增強(qiáng)型化學(xué)發(fā)光液 | AP34L015 | 500 mL |
產(chǎn)品組分
組分名稱(chēng) | A液 | B液 |
AP34L014(100 mL) | 50 mL | 50 mL |
AP34L015(500 mL) | 250 mL | 250 mL |
運(yùn)輸與保存
藍(lán)冰運(yùn)輸。4℃避光干燥保存,有效期12個(gè)月。
使用方法
取出印記膜,加入合適的封閉液在溫室下孵育20~60 min,同時(shí)振蕩,以封閉膜上非特異性蛋白結(jié)合位點(diǎn)。
將膜從封閉液中取出,與一抗工作液在溫室孵育1 h,同時(shí)振蕩;或在28℃孵育過(guò)夜,不振蕩。
將足量的洗滌緩沖液加至膜上,保證緩沖液將膜*覆蓋。振蕩孵育≥5 min,更換洗滌緩沖液并重復(fù)該步驟4~6次。增加洗滌緩沖液體積,洗滌次數(shù)和洗滌時(shí)間有助于降低背景信號(hào)。
【注】:①孵育前,膜在洗滌緩沖液中的短暫淋洗會(huì)提高洗滌效率。②按前文建議的HRP標(biāo)記二抗稀釋度非常重要的。
將HRP標(biāo)記的二抗工作液與膜在溫室孵育1 h,同時(shí)振蕩。
重復(fù)步驟3,以除去未結(jié)合的HRP標(biāo)記二抗。【注】:膜與HRP標(biāo)記二抗孵育后必須進(jìn)行*洗滌。
將A溶液與B液等比例混合,制備成工作液。每cm2膜使用0.01~0.1 mL工作液,工作液可以在溫室下穩(wěn)定8 h。
【注】:暴露于日光或其他強(qiáng)光下可能損害工作液,為獲得最佳結(jié)果,請(qǐng)將此工作液保存在琥珀色瓶中光;實(shí)驗(yàn)室的常見(jiàn)照明不會(huì)損害工作液。
將印記膜在工作液中孵育5 min。從工作液中取出印記膜,并置于一個(gè)塑料片或清潔的塑料紙(膜)中,用一張吸水紙吸除多余的液體,并從印記和塑料紙之間小心地壓出氣泡。
將包在塑料紙(膜)中的印記膜置于膠片暗盒中,蛋白質(zhì)面朝上,除適用于膠片曝光的燈(如紅色安全燈)之外,關(guān)閉所有的燈。
【注】:①膠片必須在曝光期間保持干燥;②確保將多余的底物從膜和塑料紙上*去除;③在整個(gè)膠片處理期間,使用手套。
將X光膠片置于膜的上面。建議第一次曝光60 s。之后可調(diào)整曝光時(shí)間以達(dá)到最佳結(jié)果?;瘜W(xué)發(fā)光反應(yīng)在底物孵育后的前5~30 min期間是強(qiáng)烈的。這一反應(yīng)可以持續(xù)幾個(gè)小時(shí),但強(qiáng)度會(huì)隨時(shí)間下降,如有底物孵育后較長(zhǎng)時(shí)間后曝光,曝光時(shí)間可能需要延長(zhǎng)以獲得較強(qiáng)信號(hào)。如果使用磷光存儲(chǔ)成像設(shè)備(如Bio-Rad的分子成像儀系統(tǒng))或CCD照相機(jī)可能需要較長(zhǎng)的曝光時(shí)間。
【注】:膠片與膜之間的任何移動(dòng)可能在膠片上造成人為的非特異信號(hào)。
使用合適的顯影劑和定影劑對(duì)膠片進(jìn)行顯影。如果信號(hào)太強(qiáng),則縮短曝光時(shí)間或?qū)⒂∮浤みM(jìn)行剝離并降低抗體濃度重新檢測(cè)。
注意事項(xiàng)
本產(chǎn)品僅限于科學(xué)實(shí)驗(yàn)研究使用,不得用于臨床診斷、治療等領(lǐng)域。
為獲得最佳效果,必須優(yōu)化該系統(tǒng)的全部組分,包括樣品量、一抗和二抗?jié)舛纫约澳ず头忾]試劑的類(lèi)型。該底物極其敏感,自測(cè)李記底物正常使用比大多數(shù)他牌底物少得多的樣品、一抗、二抗。
使用本產(chǎn)品比使用沉淀比色HRP底物檢測(cè)所需的抗體濃度低。為優(yōu)化抗體濃度,請(qǐng)進(jìn)行一次系統(tǒng)的點(diǎn)印跡分析。
沒(méi)有一種封閉試劑對(duì)所有系統(tǒng)而言都是最佳的,所以為每一個(gè)免疫印跡檢測(cè)系統(tǒng)找到最合適的封閉緩沖液非常必需。封閉試劑有可能與抗體產(chǎn)生交叉反應(yīng),導(dǎo)致出現(xiàn)非特異性信號(hào)。封閉緩沖液同時(shí)也會(huì)影響系統(tǒng)的靈敏性。當(dāng)從一種底物轉(zhuǎn)換為另一種底物時(shí),有時(shí)會(huì)出現(xiàn)信號(hào)衰減或背景增加的現(xiàn)象,原因可能是封閉緩沖液不適合新的檢測(cè)系統(tǒng)。
使用親和素/生*素檢測(cè)系統(tǒng)時(shí),避免使用牛奶作為封閉試劑,因?yàn)榕D讨泻胁欢康膬?nèi)源性生*素,會(huì)導(dǎo)致高背景信號(hào)。
保證洗滌緩沖液、封閉緩沖液、抗體溶液和底物工作液的使用體積,以確保在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中印跡膜*被液體覆蓋,避免膜變干。增大封閉緩沖液及洗滌緩沖液的使用量可以降低非特異性的信號(hào)。
為獲得最佳效果,在孵育步驟請(qǐng)使用搖床。
將Tween20(終濃度0.05~0.1%)加入封閉緩沖液和稀釋的抗體溶液,以降低非特異信號(hào)。使用高品質(zhì)的產(chǎn)品,如去污劑。它保存在安瓿中,過(guò)氧化物和其他雜質(zhì)含量很低。
不要使用疊氮鈉作為緩沖液的防腐劑。疊氮鈉是HRP的抑制。
避免手與膜直接接觸,實(shí)驗(yàn)過(guò)程應(yīng)戴手套或使用干凈的鑷子。
所有設(shè)備必須清潔且不沾染外來(lái)物質(zhì)。金屬器械(如剪刀)不得具有可見(jiàn)的銹跡。銹跡可能導(dǎo)致斑點(diǎn)形成和高背景。
底物工作液在室溫下可穩(wěn)定8 h。日光或任何其他強(qiáng)光下可能損害底物,為獲得最佳結(jié)果,將底物工作液保存在琥珀色瓶中,并避免長(zhǎng)期暴漏在任何強(qiáng)光下,短時(shí)間暴漏于實(shí)驗(yàn)室常規(guī)照明不會(huì)損害該工作液。
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